مقدار کمی Ct فلورسانس تشخیص اسید نوکلئیک - یک پارامتر عشق و نفرت

"برنامه تشخیص و درمان پنومونی ویروس کرونر جدید (نسخه نهم آزمایشی)" از مقدار Ct تشخیص اسید نوکلئیک ≥35 به عنوان یکی از پایه‌های مهم برای آزادسازی مدیریت جداسازی یا تخلیه استفاده می‌کند.بنابراین، مقدار Ct کیت تشخیص اسید نوکلئیک نشان دهنده چیست؟آیا مقادیر Ct کیت های مختلف قابل مقایسه هستند؟آیا هر چه مقدار Ct کمتر باشد، عملکرد کیت بهتر است؟
مقدار Ct (چرخه آستانه، Ct) تعداد چرخه های PCR است که شدت سیگنال فلورسانس کمی فلورسانس بلادرنگ از آستانه تعیین شده بیشتر شود.کیت های تشخیص اسید نوکلئیک تاج جدید را به عنوان مثال در نظر می گیرند.برای واکنش یکسان یک کیت برای شناسایی دو نمونه حاوی ویروس، A و B، اندازه مقدار Ct تا حدی نشان دهنده تعداد کپی‌های ژن ویروسی است، یعنی بار ویروسی.هر چه Ct نمونه B کمتر باشد، بار ویروسی بیشتر است.مقدار Ct با بار ویروسی و عفونی بودن آن نسبت معکوس دارد.مزایا و معایب کیت های کمی فلورسانس بلادرنگ را نمی توان صرفاً با اندازه مقدار Ct قضاوت کرد، زیرا مقادیر Ct کیت های مختلف قابل مقایسه نیستند.ارزیابی عملکرد کیت باید از جنبه‌های حساسیت (حداقل حد تشخیص)، ویژگی، دقت، پایداری و کاربرد تشخیصی اندازه‌گیری شود.هر سازنده معرف هجده نوع هنر رزمی خود را دارد، و آنها قدرت جادویی خود را در کاربرد دارند، بنابراین من در اینجا به جزئیات نمی پردازم.
برای ابزارها/سیستم‌های آنالیز کمی PCR (QPCR) معمولی، کسب مقادیر Ct و استفاده گسترده از آن‌ها در کاربردهای تشخیص پاتوژن برای همه آشناست.با توسعه صنعت و پیشرفت تکنولوژی، تجهیزات و معرف های QPCR با فرصت ها و چالش هایی مواجه شده اند.Yiou Think Tank (گزارش تحقیقاتی 2021 در مورد صنعت آزمایش ژنتیک چین: فناوری) تجزیه و تحلیل کرد که اکثر شرکت‌ها در صنعت QPCR کشور من با مشکلات رایج مبتنی بر فناوری روبرو هستند.در پاسخ به این مشکلات، راه حل ها عمدتاً به دو نوع تقسیم می شوند: تسریع در بهبود فناوری و به کارگیری فناوری های جدید.
POCT برای تشخیص مولکولی QPCR یکی از جهت‌های توسعه صنعت است و بهبود عملکرد عامل مهمی برای تسریع استفاده از فناوری است.برای تجهیزات POCT با توان عملیاتی تک نمونه QPCR، چگونه می توان مقدار Ct پارامتر کلیدی یک واکنش واحد را در تحقیق و توسعه بهینه کرد؟تجهیزات مشابه، سیستم واکنش یکسان، و غلظت الگوی یکسان، از لحاظ نظری، هر چه مقدار Ct یک واکنش واحد بیشتر باشد، بازده آنزیم در واکنش کمتر است.
در فرآیند بهبود کارایی واکنش آنزیمی و بهینه‌سازی مقدار Ct، ابتدا می‌توان منحنی تکثیر کمی فلورسانس سیکل PCR 40 را تجزیه و تحلیل کرد.منحنی تقویت در شکل زیر به فاز زمینه فلورسانس، فاز تقویت نمایی، فاز خطی و فاز فلات تقسیم شده است.برای دستیابی به پس‌زمینه فلورسانس پایین‌تر، تا آنجا که ممکن است برای تشخیص آن از مقدار فلورسانس تقویت نمایی اولیه، آزمایش از حامل مواد مصرفی واکنش، غربالگری طراحی پروب پرایمر و سیستم بافر واکنش انجام شود.دوره تقویت نمایی مستقیم ترین واکنش فعالیت آنزیم است و همچنین اثبات هماهنگی کامل تجهیزات POCT، حامل های واکنش و معرف ها است.در این زمان، کنترل دمای تجهیزات، اکتساب سیگنال نوری و تجزیه و تحلیل، زیست سازگاری حامل، و عملکرد سیستم معرف ها باید در همه جنبه ها تنظیم و آزمایش شوند.در نهایت، کل تقویت کامل می شود و نتایج باید توسط یک الگوریتم داده دقیق ارائه شود تا یک مقدار Ct معقول به دست آید.

یک قدم کوچک در بهینه سازی مقدار Ct، گام های بی شمار پرسنل تحقیق و توسعه است.در اضطراب و هیجان شبانه روز، هر بار که «کوه و رود دیده نمی‌شود، بیدها تاریک و گل‌ها روشن و روستایی دیگر وجود دارد» که به ما شهامت و اشتیاق می‌دهد تا به جلو برویم. از نو.